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當前位(wèi)置:首頁技術文章你是按這(zhè)個程(chéng)序(xù)操作AFT免疫親和柱的嗎?

你是按這個程序(xù)操(cāo)作(zuò)AFT免(miǎn)疫親和柱(zhù)的嗎(má)?

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  AFT(aflatoxin)免疫(yì)親和柱產品概述:
  AFT(aflatoxin)是一類真菌(如(rú)黃曲黴(méi)和寄(jì)生曲(qū)黴(méi))的有(yǒu)毒性(xìng)的代謝產物,是一(yī)種毒性*的物質(zhì),具有很強(qiáng)的致(zhì)癌性(xìng)。AFT(aflatoxin)的(dí)危害性(xìng)在於(yú)對(duì)人(rén)及動(dòng)物肝髒組織的(dí)破壞(huài)作用,嚴重時可導(dǎo)致肝癌甚至(zhì)死亡。在(zài)天(tiān)然汙染(rǎn)的(dí)食品(pǐn)中(zhōng)以(yǐ)AFT(aflatoxin)B1常(cháng)見,其毒(dú)性(xìng)和致癌(ái)性也(yě)是(shì)*的。在(zài)玉米,花(huā)生,小(xiǎo)麥,棉花種(zhǒng)子和一些(xiē)幹果(guǒ)中(zhōng)常能(néng)檢測到(dào)AFT(aflatoxin)B1。
 
  反應(yīng)原(yuán)理(lǐ):
  AFT(aflatoxin)B1免(miǎn)疫(yì)層析親和柱測定(dìng)的原理是(shì)抗原抗體(tǐ)反應。AFT(aflatoxin)B1單(dān)克隆(lóng)抗(kàng)體固(gù)定於柱內凝(níng)膠(jiāo)上,樣(yàng)品(pǐn)中(zhōng)的AFT(aflatoxin)B1經(jīng)過提取(qǔ),過濾,稀釋,然後(hòu)緩慢通過(guò)AFT(aflatoxin)B1免疫親和柱,在柱(zhù)內AFT(aflatoxin)B1與抗體特異性(xìng)結合,之後洗(xǐ)滌(dí)免疫親(qīn)和柱,除(chú)去(qù)未結合(hé)的(dí)其他(tā)物質。用甲(jiǎ)醇洗脫(tuō)AFT(aflatoxin)B1,注入到分析(xī)儀器中(zhōng)進行檢測(cè)。

  AFT(aflatoxin)免疫(yì)親(qīn)和柱的操作(zuò)程(chéng)序:
  1,連接:將免疫親(qīn)和柱後蓋(gài)取下(xià),用剪(jiǎn)刀剪開,重(zhòng)新蓋(gài)上,連接(jiē)於(yú)泵(bèng)流操作架(jià)的(dí)30mL注射(shè)器下;
  2,上樣(yàng):移取上(shàng)述提取(qǔ)液移至注(zhù)射(shè)器內(nèi),打(dǎ)開(kāi)下端(duān)堵頭;
  3,富集:將(jiāng)空(kōng)氣壓(yā)力(lì)泵(bèng)與注射器(qì)連(lián)接,調(tiáo)節(jié)壓(yā)力(lì)使(shǐ)樣品(pǐn)提(tí)取(qǔ)液(yè)緩(huǎn)慢通過(guò)免(miǎn)疫親和柱,建議(yì)重(zhòng)力(lì)過柱(zhù);
  4,洗(xǐ)滌:用20mL蒸餾水(shuǐ)分(fēn)兩次(cì)加(jiā)壓(yā)清(qīng)洗,棄去(qù)全(quán)部流(liú)出液(yè),並(bìng)使2-3mL空(kōng)氣通(tōng)過(guò)柱體;
  5,洗脫(tuō):為保證(zhèng)洗脫(tuō)充(chōng)分,以2.0mL色譜級(jí)甲(jiǎ)醇進(jìn)行(háng)洗脫,重力洗脫(tuō)即可。先,將(jiāng)免(miǎn)疫親和柱內液體排(pái)幹,加1.0mL甲醇於柱(zhù)管內(nèi),重(zhòng)力(lì)過柱,當溶(róng)劑(jì)通過柱子後(hòu);再加入(rù)1.0mL甲醇重(zhòng)復上述洗脫步(bù)驟,後(hòu)輕微加壓(yā)排淨洗脫液,合並(bìng)洗脫液(yè),將洗脫(tuō)液濃縮吹(chuī)幹,用1mL流(liú)動相復溶(róng),渦旋30s溶解(jiě)殘(cán)餘(yú)物(wù),0.22μm濾膜過濾,待(dài)測。
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