熒(yíng)光免疫分析儀(yí)的(dí)技(jì)術(shù)原(yuán)理(lǐ)
熒光免疫檢(jiǎn)測技術具(jù)有專(zhuān)一(yī)性(xìng)強(qiáng),靈(líng)敏(mǐn)度(dù)高(gāo),實(shí)用性(xìng)好(hǎo)等(děng)優(yōu)點(diǎn),因此(cǐ)它被用於(yú)測量含量很(hěn)低的生(shēng)物(wù)活性化(huà)合(hé)物(wù),例如蛋白質(酶,接受(shòu)體(tǐ),抗(kàng)體),激(jī)素(sù)(甾族化合(hé)物(wù),甲狀(zhuàng)腺(xiàn)激(jī)素,酞(tài)激素),藥物及微生物等(děng)。
原理(lǐ)
作為免(miǎn)疫分析(xī)法(fǎ)的一(yī)種,FIA同(tóng)樣存(cún)在兩種(zhǒng)模式,即競爭型(xíng)和夾(jiā)心型。其中競爭型(xíng)(以(yǐ)標記(jì)抗(kàng)原的競爭型(xíng)為例)的測(cè)定(dìng)原理(lǐ)是基於未(wèi)標記的抗(kàng)原(Ag)和標記抗(kàng)原(yuán)(Ag-L)競爭(zhēng)結合有(yǒu)限的抗(kàng)體(Ab)而實(shí)現的(dí)免疫分析法。檢(jiǎn)測時,Ab和(hé)Ag-L的濃(nóng)度是固定的。當(dāng)未(wèi)標記(jì)的Ag加(jiā)到(dào)Ab和(hé)Ag-L的免(miǎn)疫混合物(wù)中後,Ag和(hé)Ab的結合使得(dé)Ag-L與Ab的免(miǎn)疫復合物的(dí)量減(jiǎn)少(shǎo)。樣(yàng)品(pǐn)中存在的(dí)Ag越(yuè)多,Ab結(jié)合(hé)的Ag-L便越(yuè)少,從Ab-Ag-L免疫復合物(wù)的減(jiǎn)少(shǎo)或遊(yóu)離Ag-L的(dí)增加,可(kě)以定(dìng)量(liáng)測(cè)定出樣(yàng)品中待測抗(kàng)原的含量。其反應過(guò)程如(rú)下:Ag+Ag-L+Ab≒(Ag:Ab)+(Ag-L:Ab)
對(duì)夾心型(xíng)免(miǎn)疫分析(xī)來說,其反應(yīng)原理是(shì)在(zài)免疫反(fǎn)應(yīng)的載(zǎi)體(tǐ)上(shàng)固定(dìng)過量的Ab,然(rán)後(hòu)加入一(yī)定量(liáng)的(dí)Ag,免疫反(fǎn)應(yīng)後(hòu),再(zài)加入過量(liáng)的標記抗體(tǐ)(Ab-L),以形成(chéng)“三(sān)明(míng)治”式夾心免疫(yì)復合物。樣品中存在的Ag越(yuè)多,結合的(dí)Ab-L也(yě)越多(duō),夾(jiā)心免疫復(fù)合(hé)物的(dí)標記(jì)熒(yíng)光信號(hào)就越(yuè)強。反應過(guò)程如(rú)下(xià):Ab+Ag≒Ab:Ag≒Ab:Ag:Ab-L。