黃(huáng)曲黴(méi)毒素(sù)熒(yíng)光(guāng)定量(liáng)檢測卡主(zhǔ)要(yào)的(dí)結構為二(èr)呋喃環及(jí)香(xiāng)豆素。目(mù)前(qián)已發(fā)現的(dí)20多種(zhǒng)黃(huáng)曲黴毒結(jié)構(gòu)之(zhī)中(zhōng),常見的(dí)有 AFB1,AFB2,AFG1,AFG2,其中黃曲黴毒(dú)素 B1(AFB1) 毒(dú)性(xìng)zui強(qiáng),被癌症研究機構IARC劃(huá)定(dìng)為 IA類(lèi)致(zhì)癌物。由(yóu)於黃曲黴(méi)和寄生(shēng)曲黴在自(zì)然(rán)界(jiè)的分布很(hěn)廣(guǎng),而(ér)且很多食(shí)品基質本身(shēn)的(dí)濕度為(wéi)菌落(là)的(dí)繁(fán)殖和毒素的產(chǎn)生提供了有(yǒu)利(lì)條件,農作物在(zài)田間受到黃曲黴的(dí)汙染(rǎn),收(shōu)割(gē)後貯藏過程(chéng)中(zhōng)如溫(wēn)度和(hé)濕(shī)度適宜(yí),黃曲(qū)黴(méi)孢(bāo)子(zǐ)會大量繁(fán)殖(zhí)產(chǎn)生(shēng)更多的毒素,在糧(liáng)食(shí)和飼(sì)料的貯藏過程(chéng)中不(bù)可避免(miǎn)產生(shēng)毒(dú)素。
黃曲黴毒素(sù)M1(AFM1) 時(shí)間分辨(biàn)熒光(guāng)免(miǎn)疫層(céng)析定量檢(jiǎn)測卡應(yīng)用(yòng)競(jìng)爭(zhēng)抑製(zhì)免(miǎn)疫層析的原理(lǐ),樣本(běn)中(zhōng)若(ruò)含(hán)有AFM1,則在(zài)側向移動的過(guò)程中(zhōng)會(huì)與熒光微(wēi)球(qiú)標記(jì)的(dí)特(tè)異(yì)性單克(kè)隆抗體反應,抑製(zhì)抗(kàng)體和NC 膜檢(jiǎn)測(cè)綫(xiàn)上AFM1 - MSA 偶聯物的結合(hé)。隨(suí)著(zhuó)樣本(běn)中AFM1 含量(liáng)的(dí)升高,結(jié)合於檢測(cè)綫上的(dí)抗(kàng)體量(liáng)減(jiǎn)少,相(xiāng)應(yīng)的(dí)檢(jiǎn)測綫熒(yíng)光(guāng)強度也隨之變(biàn)弱(ruò)。使(shǐ)用時(shí)間分辨(biàn)熒(yíng)光(guāng)免(miǎn)疫(yì)層(céng)析檢(jiǎn)測(cè)儀(yí)讀(dú)數,可(kě)定量的(dí)測出樣(yàng)本中AFM1 的含(hán)量(liáng)。
黃曲黴毒(dú)素(sù)熒(yíng)光(guāng)定量(liáng)檢(jiǎn)測卡試驗方法:
1,樣(yàng)品的前(qián)處(chǔ)理(lǐ):
取具有(yǒu)代表(biǎo)性的待(dài)測樣品(pǐn)500g,用小型(xíng)粉(fěn)碎機粉碎1min後過20目篩,收集過篩的細(xì)小樣品。稱(chēng)取(qǔ)1.0±0.02g過(guò)篩(shāi)的樣品(pǐn)於(yú)10mL離(lí)心(xīn)管(guǎn)中(zhōng),加入5mL提(tí)取液(yè),用漩(xuán)渦混匀(yún)儀震(zhèn)蕩5min(或者(zhě)搖(yáo)床(chuáng)振蕩10min)後(hòu),4000RPM離(lí)心(xīn)1min,取上(shàng)清(qīng)。
2,檢測過(guò)程(chéng):
取(qǔ)50μL離心上(shàng)清(qīng)液加入(rù)500μL樣品(pǐn)稀釋(shì)液中,用漩(xuán)渦(wō)混(hùn)匀(yún)器(qì)混匀(yún)3-5s,然(rán)後(hòu)取100μL加入(rù)到黃曲(qū)黴(méi)毒(dú)素(sù)B1熒光定量快速檢測卡的(dí)加(jiā)樣(yàng)孔中,置(zhì)於37℃恒(héng)溫孵育(yù)器中溫育10min後,將試紙條(tiáo)插(chā)入熒(yíng)光免疫(yì)定量(liáng)分析儀中讀數(shù),即為樣品的(dí)實(shí)際檢(jiǎn)測濃度(dù)。當檢測值大於5000μg/kg時,可用提取(qǔ)液(yè)將離(lí)心(xīn)上清(qīng)液稀(xī)釋5倍(bèi)後(hòu)再(zài)進行(háng)檢測,所(suǒ)得讀數(shù)值(zhí)乘(chéng)以(yǐ)對應的稀釋(shì)倍(bèi)數即(jí)為(wéi)終的檢驗(yàn)結果(guǒ)。