熒(yíng)光(guāng)免疫分(fēn)析原理及優點(diǎn)
熒光免(miǎn)疫檢(jiǎn)測技(jì)術(shù)具有專一性強(qiáng),靈(líng)敏(mǐn)度(dù)高(gāo),實用性好(hǎo)等優(yōu)點(diǎn),因(yīn)此它被用於測(cè)量含(hán)量很(hěn)低(dī)的(dí)生物(wù)活(huó)性化合物(wù),例(lì)如蛋白質(zhì)(酶,接受體,抗(kàng)體),激素(sù)(甾族(zú)化合(hé)物,甲狀腺激素(sù),酞激素),藥(yào)物(wù)及(jí)微生物等。
熒光(guāng)免疫(yì)分析原理
作(zuò)為免(miǎn)疫分(fēn)析法的一種,FIA同樣存在兩(liǎng)種模(mó)式,即(jí)競爭型和(hé)夾心型。其中競(jìng)爭型(xíng)(以標(biāo)記(jì)抗原的(dí)競爭型(xíng)為例)的測定(dìng)原理(lǐ)是(shì)基於(yú)未標(biāo)記的(dí)抗原(Ag)和(hé)標記抗原(yuán)(Ag-L)競爭結合(hé)有(yǒu)限的(dí)抗體(Ab)而實(shí)現的免(miǎn)疫分析法(fǎ)。檢測(cè)時,Ab和Ag-L的濃度是(shì)固定的。當(dāng)未(wèi)標記(jì)的Ag加到Ab和Ag-L的(dí)免疫(yì)混(hùn)合物(wù)中(zhōng)後,Ag和Ab的(dí)結合(hé)使(shǐ)得(dé)Ag-L與Ab的(dí)免(miǎn)疫復合物的(dí)量減少。樣品中存在(zài)的(dí)Ag越(yuè)多,Ab結(jié)合的(dí)Ag-L便(biàn)越少(shǎo),從(cóng)Ab-Ag-L免(miǎn)疫(yì)復合物(wù)的(dí)減少(shǎo)或(huò)遊離(lí)Ag-L的增(zēng)加,可(kě)以(yǐ)定量測(cè)定(dìng)出樣品中(zhōng)待(dài)測抗(kàng)原的(dí)含量。其反應(yīng)過(guò)程如(rú)下:Ag+Ag-L+Ab≒(Ag:Ab)+(Ag-L:Ab)
對夾(jiā)心型(xíng)免(miǎn)疫分(fēn)析來(lái)說,其反應(yīng)原理(lǐ)是(shì)在(zài)免疫(yì)反應的載(zǎi)體上固定(dìng)過(guò)量的Ab,然後加入(rù)一(yī)定量(liáng)的(dí)Ag,免疫反應(yīng)後,再加(jiā)入(rù)過量的標記抗(kàng)體(Ab-L),以形(xíng)成“三(sān)明治(zhì)”式(shì)夾心免(miǎn)疫復(fù)合(hé)物(wù)。樣品(pǐn)中(zhōng)存在的Ag越(yuè)多(duō),結(jié)合的Ab-L也(yě)越(yuè)多(duō),夾(jiā)心(xīn)免疫(yì)復合物(wù)的標記熒(yíng)光(guāng)信號(hào)就越強。反應(yīng)過程如下(xià):Ab+Ag≒Ab:Ag≒Ab:Ag:Ab-L。